Kết quả khảo sát cho thấy hiệu suất cao khô và diện tích peak Adenosine thu được nhiều nhất ở lần ly trích đầu tiên và qua các lần ly trích 2 và 3 thì hầu như giá trị này không thay đổi đáng kể. Điều đó chứng tỏ ly trích bằng phương pháp ngâm dầm với dung môi ethanol 60% đạt hiệu suất cao qua 1 lần ly trích. Vì vậy, trong khảo sát này nhóm chọn số lần ly trích là 1 lần làm điều kiện tối ưu cho quy trình ly trích Adenosine trong nấm ĐTHT.
Sau khi thực hiện khảo sát quy trình ly trích Adenosine trong ĐTHT, tiếp tục tiến hành thực hiện ly trích Adenosine trong ĐTHT theo quy trình ly trích tối ưu, và xác định hàm lượng Adenosine bằng HPLC, đã thu được các số liệu như Bảng 2.
Bảng 2. Hàm lượng Adenosine trong ĐTHT
4. Kết luận
Trong nghiên cứu này đã thực hiện ly trích và khảo sát các thông số ảnh hưởng lên quá trình ly trích Adenosine trong nấm ĐTHT được nuôi trồng tại phòng thí nghiệm Trường Đại học Trà Vinh, cụ thể: dung môi tối ưu là ethanol 60%, tỉ lệ rắn lỏng 100mg/10mL, nhiệt độ ly trích là 80oC, thời gian ly trích 4 giờ, và trích kiệt trong 1 lần trích. Sử dụng phương pháp phân tích trên thiết bị HPLC-PDA, cột ODS-C18 (250mm x 4.6mm x 5mm), tại bước sóng 260nm. Chương trình rửa giải isocratic với hệ pha động Acetonitrile/dung dịch đệm phosphat pH 6,5 (tỷ lệ 8/92). Nhiệt độ cột 30oC, tốc độ dòng: 0,6 mL/phút. Thể tích tiêm 20µL. Từ đó, xây dựng được phương trình đường chuẩn y = 24.583x -14.086 với hệ số R2 = 0.9911. Và xác định được hàm lượng Adenosine trong ĐTHT là 537,7mg/Kg. Cùng với những nghiên cứu về ứng dụng của ĐTHT trong dược phẩm và thực phẩm, đề tài nghiên cứu quy trình ly trích và xác định hàm lượng Adenosine trong cao ethanol của ĐTHT (Cordyceps Militaris) bằng HPLC-PDA càng có ý nghĩa quan trọng trong bổ sung nguồn dữ liệu nghiên cứu về dược liệu ĐTHT và định hướng ứng dụng trong dược phẩm và mỹ phẩm.
TÀI LIỆU THAM KHẢO:
1. Nguyễn Thị Liên Thương, Trịnh Diệp Phương Danh và Nguyễn Văn Hiệp, 2016. Nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris: Đặc điểm sinh học, giá trị dược liệu và các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi trồng nấm. Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ. 44b: 9-22.
2. Nguyễn Ngọc Trai (2017), "Bước đầu nghiên cứu quy trình nuôi nấm đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) có nguồn gốc từ Nhật Bản tại Trà Vinh”, Báo cáo tổng kết đề tài NCKH cấp trường, Trường Đại học Trà Vinh, QT6.2/KHCN 1 - BM3.
3. Chử Văn Mến,Vũ Tuấn Anh, Nguyễn Văn Long và cộng sự (2015), “Nghiên cứu định lượng Adenosine trong Đông trùng hạ thảo (Cordyceps spp.) bằng phương pháp HPLC”, Tạp chí Y - Dược học quân sự, 9, pp. 18-23.
4. Nguyễn Thị Quế Mai (2015), “Xây dựng phương pháp định tính, định lượng đồng thời Adenosin và Cordycepin trong chế phẩm chứa Đông trùng hạ thảo bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao”, Luận văn thạc sĩ Trường Đại học Dược Hà Nội.
5. Phạm Văn Hiển, Nguyễn Duy Bắc, Nguyễn Thị Thủy và cộng sự (2016), "Đánh giá hàm lượng adenosin và cordycepin trong các bộ phận khác nhau của Đông trùng hạ thảo nuôi cấy (Cordyceps sinensis (Berk)) Sacc bằng phương pháp HPLC," Tạp chí Dược học, số 486 tr.28-32.
6. Phạm Văn Hiển, Lê Minh Hoàng, Lê Thị Huyền Trang và cộng sự (2017), “Nghiên cứu bào chế bột cao khô Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris L. Ex Fr. Link) nuôi cấy tại Việt Nam bằng phương pháp phun sấy”, Tạp chí Dược học, số 497, tr.70-73.
7. Lei Huang, Qizhang Li, Yiyuan Chen, Xuefei Wang and Xuanwei Zhou (2009). Determination and analysis of cordycepin and Adenosine in the products of Cordyceps spp. African Journal of Microbiology Research, 3(12), pp. 957-961.
8. Dương Ngọc Tú, Hồ Văn Khánh, Nguyễn Quyết Tiến và cộng sự (2018). Chiết xuất và phân lập một số hợp chất từ Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) nuôi cấy tại Đà Lạt. Tạp chí Dược học, 1(T58).
9. Lê Thị Huyền Trang, Lê Minh Hoàng, Nguyễn Duy Bắc và cộng sự (2017). Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết xuất adenosin và cordycepin từ Đông trùng hạ thảo nuôi cấy (Cordyceps militaris). Tạp chí Dược học, 4(T57).
10. Lê Thị Huyền Trang, Lê Minh Hoàng, Nguyễn Duy Bắc và cộng sự (2018). Extraction of Adenosine and cordycepin from spent solid medium of cordyceps militaris culture. Vietnam Journal of Science and Technology, 56(4A), pp.221-228.
11. Jian Ya Linga, Guo Ying Zhang, Jian Qun Lina, Zhao Jie Cui, Chang Kai Zhanga (2009). Supercritical fluid extraction of cordycepin and Adenosine from Cordyceps kyushuensis and purification by high-speed counter-current chromatography. Separation and Purification Technology, 66(3), pp. 625-629.
12. Li Deng, Tong-Yong Zhou, Li Pi, Xiao-Hui Zhao, Tao Han, Yi-Kang Li And Fa Han (2013). Optimization of Microwave-Assisted Extraction of Cordycepic Acid and Cordycepin from Cultured Cordyceps militaris by Response Surface Methodology. Asian Journal of Chemistry, 25(14), pp.8065-8071.
13. Hardeep S. Tuli1, S. S. Sandhu, Dharambir Kashyap and Anil K. Sharma (2014). Optimization of extraction conditions and antimicrobial potential of a bioactive metabolite, cordycepin from cordyceps militaris 3936. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(4), pp. 1525-1535.
14. Jiamin Li, Minyi Guan and Yi Li (2015). Effects of cooking on the contents of Adenosine and cordycepin in Cordyceps militaris. Procedia Engineering, 102,485-491.
15. Zheng-Ming Qian, Chun-Hong Li, Yue-Lin Song, Miao-Xia Zhou, and Wen-Jia Li (2019). Rapid determination of Adenosine in cordyceps by online extraction HPLC. Journal of Chromatographic Science, 57(4), pp.381-384.
16. Yung-Jen Tsai, Lie-Chwen Lin, and Tung-Hu Tsai (2010). Pharmacokinetics of Adenosine and Cordycepin, a Bioactive Constituent of Cordyceps sinensis in Rat. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 58(8), pp.4638-4643. DOI: 10.1021/jf100269g
17. Harry G. Brittain (1998). Analytical profiles of Drug Substances and Excipients. USA: Academic Press Inc.
A STUDY ON THE EXTRACTION PROCESS AND DETERMINING THE CONTENT OF ADENOSINE IN THE ETHANOLIC EXTRACT OF Cordyceps Militaris BY USING THE HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) METHOD • Master. NGUYEN THI THU HA • Master. NGUYEN NGOC TRAI • Master. NGUYEN THIEN THAO Tra Vinh University ABSTRACT: Cordyceps militaris, which is a species of parasitic on insects, have many medicinal values and they are used in functional foods and pharmaceutical products. Researches on Cordyceps militaris and methods of extracting chemical compounds from Cordyceps militaris have recently received attention. This study analyzes the extraction method and determines the content of Adenosin in the ethanolic extract of Cordyceps militaris by using the high-performance liquid chromatography (HPLC) method. The Adenosin was extracted by using the soaking method with optimal conditions (60% ethanol extraction solvent, 100/10 liquid solid ratio (mg/mL), 4-hours of extraction, and at 80oC) with the yield of 54,8% and the extracted Adenosin content is 537,7 mg/kg. Keywords: Adenosine, Cordyceps militaris, high-performance liquid chromatography method, Cordyceps Fungi. |
ThS. NGUYỄN THỊ THU HÀ - ThS. NGUYỄN NGỌC TRAI - ThS. NGUYỄN THIỆN THẢO - Trường Đại học Trà Vinh
(Nguồn: Tạp chí Công Thương - Các kết quả nghiên cứu khoa học và ứng dụng công nghệ, Số 9, tháng 5 năm 2020)